Etude d'un mécanisme d'action d'une molécule anti-cancéreuse: la bléomycine

L'ADN de nos cellules est le support de l'information génétique. Cet ADN est continuellement soumis à des agressions qui peuvent provoquer des dommages irréversibles pour la cellule et peuvent entrainer l'apparition de cancers. Afin de limiter ces dommages, il existe des mécanismes de réparation dont le Nucleotid Excision Repair (NER) et la Recombinaison Homologue (HR).
Le NER est un système qui prend en charge des dommages induisant des modifications structurales de l'ADN comme, par exemple, la formation de dimères de thymine après une exposition aux UV. La réparation des dimères de thymine fait intervenir diverses enzymes, principalement l'ADN polymérase.
La HR répare les dommages qui affectent la structure chimique des bases de l'ADN. Cette recombinaison homologue intervient quand il y a des cassures double brin. Elle permet la transmission fidèle du chromosome aux cellules filles. Ce système permet aussi de créer de la diversité génétique en brassant les gènes provenant des chromosomes parentaux par crossing-over.
Au cours de ce TP, nous mettrons en évidence l'implication des produits des gènes RAD1, RAD2, RAD51 et RAD52 (ici notés A, B, C et D) de la levure Saccharomyces cerevisiae dans les deux mécanismes de réparation décrits précédemment.
Nous utiliserons une souche sauvage (Y10000), et des souches mutantes où les gènes énoncés précédemment ont été invalidés et confrontées à la présence de dimère de thymine (irradiation aux UV), ou à des cassures double brin générées in vitro par des enzymes de restriction.
La souche mutante étudiée par notre groupe est la souche nommée A.
Deux souches sont mutantes pour RAD1 et RAD2 impliqués dans les processus de NER, et les deux autres sont mutantes pour RAD51 et RAD52 impliqués dans les processus de HR.
Ces différents mutants seront aussi testés pour leur sensibilité à une molécule anticancéreuse : la bléomycine, qui est un agent mutagène. Ceci nous permettra de conclure sur le type de dommage que provoque cette molécule au niveau de l'ADN.
Remarque : toutes les manipulations se font en conditions stériles pour éviter des contaminations extérieures.