Propriétés de cellules d’hépatocarcinome humain n’exprimant plus la protéine Unr

Mémoire Sciences & technologies Biologie

Date de publication :

04/06/2008

Langue :

Français

Format :

.doc

Nombre de pages :

7 pages

Niveau :

avancé

Consulté :

0 fois

Avis client :

non évalué

Validé par :

le comité Oboulo.com

6,95 € Ajouter au panier

Sommaire :

Sommaire

Découverte du gène unr
Rôle fonctionnel et biologique de la protéine unr
Matériels et méthodes
1. La culture cellulaire des lignées HuH-7
2. Extraction et dosage des ARN
3. Transfection transitoire à la Lipofectamine
4. Extraction et dosage de protéines
5. Western blot
6. Cis platine
7. RT-PCR quantitative en temps réel
8. Test MTT
Résultats
1. Éteindre efficacement et spécifiquement Unr
2. Effet de l'extinction sur l'expression de protéines de la voie FAK/?1 intégrine
3. Étudier l'effet de l'extinction d'unr dans la mort induite par le Cis-Platine

Résumé :

L'objectif de mon travail de recherche de Master1 a été de déterminer les conséquences de l'extinction de l'expression de la protéine unr (Upstream of N-ras) sur la survie des cellules d'hépatocarcinome HuH-7, et sur l'expression de protéines candidates, cibles d'unr.
Ce projet fait suite à une étude réalisée dans des cellules souches embryonnaires (ES) de souris nulles pour unr. Ces cellules montraient une résistance à l'apoptose induite par certains stress, liée à une diminution d'expression de la protéine p53, régulateur positif de l'apoptose, et à des changements d'adhérence, liés à l'induction de l'intégrine 1 en particulier.
Nous avons voulu rechercher si les conséquences phénotypiques de l'extinction d'unr dans les cellules tumorales humaines HuH-7 avaient des conséquences similaires, compte tenu que ces cellules comme la plupart des cellules tumorales ont la particularité d'exprimer une forme mutée de la protéine p53 l'inactivant en tant que facteur de transcription. Or, une voie majeure d'induction de l'apoptose en réponse aux lésions de l'ADN dans des cellules normales mets en jeu la protéine p53. Nous allons donc rechercher d'autres voies modulées par unr impliquées dans la réponse apoptotique des cellules HuH-7.