Le silencing chez A.thaliana

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$Document biologie : Le silencing chez A.thaliana$ biologie

exposé

publié le 01/04/2008

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Résumé

En 1990, Jorgensen, qui cherche à intensifier la coloration de pétunias, fabrique des plantes qui portent un transgene codant pour un pigment homologue au gène endogène. Contrairement à ce qu’il attendait, il se rend compte que les plantes ainsi obtenues n’ont pas une coloration plus intense, mais qu’au contraire celle-ci est fortement atténuée voire totalement abolie. Sans le savoir, il vient de mettre en évidence un phénomène qui a depuis pris une très grande importance dans le monde de la biologie, a tel point qu’elle est a l’origine du dernier prix Nobel décerné : le siRNA (pour small interference RNA) Bien que depuis, des progrès importants aient étés réalisés dans la compréhension de ce phénomène, le TP dont les résultats seront présentés par la suite s’inspire d’une expérience historique (Elmayan et al. 1998). A cette époque, le siRNA n’était pas aussi largement admis qu’aujourd’hui, le premier but de ces expériences est donc de le mettre en évidence, c'est-àdire de montrer que l’augmentation du nombre de copies de gènes homologues dans le génome d’une plante mène à leur inactivation. De plus l’analyse des transcrits dans les plantes subissant ce silencing révèle un phénomène étonnant : dans certains cas, l’extinction d’un gène s’accompagne d’une disparition de l’accumulation de ses ARNm, alors que dans d’autres, ces ARNm restent détectables dans le cytoplasme

Sommaire

Matériels et méthodes
1. Matériel végétal
2. Méthodes
Résultats
1. Test de résistance à la kanamycine
2. PCR
3. Transfert sur MB et hybridation ( southern)
4. Clonage d'un produit de PCR
5. Dosage fluorémétrique del'activité Beta Gluc
6. Détection colorimétrique in planta de l'activité GUS
Interprétations