Travaux pratiques: Le cytosquelette des cellules cancéreuses de colon Humain HT29.

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$Document biologie : Travaux pratiques: Le cytosquelette des cellules cancéreuses de colon Humain HT29.$ biologie

publié le 04/03/2008

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Résumé

Le but de cette expérimentation est de comparer le cytosquelette de cellules cancéreuses de colon humain ht29 par rapport au cytosquelette de cellules saines au niveau de l’agencement de protéines.
Pour pouvoir comparer ces cellules, il faut détecter les protéines du cytosquelette. On s’intéresse à quatre protéines, la tubuline, l’actine, l’α-actinine et la cytokératine et à leurs localisations intracellulaires.
Le principe de la détection des protéines par Immunofluorescence Indirecte :
Une protéine donnée peut être considérée comme un antigène par un anticorps spécifique monoclonal. Cet anticorps est lui-même reconnu par un anticorps secondaire couplé à un fluorochrome. C’est ce dernier qui, par immunofluorescence, permet de localiser la protéine d’intérêt. L’anticorps secondaire est polyclonal, ce qui signifie qu’ils peuvent se fixer à plusieurs sur le premier anticorps et amplifier le signal.